益生菌检测方法

       近年来，随着环境保护要求的提高和抗生素使用的限制，基于微生态的新一代益生菌产品发展迅速，正在形成产业。但目前市场上许多益生菌产品质量仍不稳定，生产尚处于配制和仿制阶段，检测方法也不完善。许多益生菌产品的标准和测试方法也令人困惑。此外，由于缺乏优秀的检测人员，市场上的益生菌产品难以检测。因此，我们将对益生菌的检测方法进行简要的探讨，希望能更好的完善益生菌质量检测市场。

一、益生菌检测与生长的测量方法
       通过测定一定体积培养液中菌丝体的含量来反映微生物的生长。方法是在分级离心管中取一定量的培养基（如10ml），设定一定的离心时间（如5min）和转速（如5000rpm），离心，倒出上清液。上清液体积为v时，菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝体浓度的测定是大规模工业发酵生产中微生物生长的重要监测指标。这种方法相对简单、简单、快速，但需要建立一致的处理条件，否则偏差很大，而且由于离心沉积物中夹杂了一些固体养分，会出现一定的偏差。
二、益生菌的检测与称重方法
       它可以通过离心或过滤来测定。通常干重是湿重的10-20%。离心法是将一定体积的待测培养基倒入离心管中，设定一定的离心时间和离心速度，离心，用水冲洗1-5次，干燥。干燥可以在105或100摄氏度的烤箱中进行，也可以在红外线下进行。如果采用过滤法，丝状真菌可以用滤纸过滤，细菌可以用醋酸纤维素膜等滤膜过滤，过滤后用少量水冲洗，400℃真空干燥，干重法比较麻烦。当微生物产品通常是细菌细胞，如活性干酵母（ady）时，通常使用这种方法。
三、浊度法检测益生菌
       微生物的生长导致培养物的浑浊度增加。用紫外分光光度计测定微生物在特定波长的吸光度，判断微生物的生长状态。定期培养细胞时，可使用带侧臂的特殊三角瓶。通过将侧臂插入光电比色计的比色孔中，可以在任何时间测量生长，而不需要使用细菌溶液。该方法主要用于发酵工业中细菌细胞的生长监测。例如，我用紫外可见分光光度计测量发酵液的吸光度od600，其中色度计的波长为600nm。
四、益生菌检测、染色及计数方法
       为了弥补油镜下观察和计数某些微生物的困难，并利用血细胞计数板法直接区分死细胞和活细胞，发明了染色法。用不同的染料染色细胞，在显微镜下更容易计数活细菌。例如，酵母活细胞计数可以用亚甲基蓝染色。染色后，在显微镜下，活细胞是无色的，而死细胞是蓝色的。
五、血细胞计数板检测益生菌
       血细胞计数板是一种具有特殊结构尺寸和厚度的厚玻璃板。玻璃板有四个凹槽和两个铜钹。中心有一个短的横向槽和两个平台。两个平台的表面高度为0.1 mm。每个平台都刻有不同规格的网格。中心0.1平方毫米的区域刻有400个小正方形。通过观察油镜，可以计算出大细胞中的微生物数量，并计算出1毫升细菌溶液中所含的细胞数量。该方法简单、直观、快速，但仅适用于单细胞状态下微生物或丝状微生物产孢的计数。结果是包括死细胞在内的细菌总数。
六、益生菌检测的比例计数法
       将已知颗粒的液体（如真菌孢子或红细胞）与待测细胞浓度的细菌溶液均匀混合，计算出显微视野中的相应数字，即：可以得到未知菌液的细胞浓度。计数方法比较广泛，应以已知颗粒浓度的悬浮液为标准。
七、连续液体稀释法检测益生菌
       未知细菌样品连续稀释10倍。根据估计量，从最合适的3个连续10倍稀释溶液中取5ml样品，接种于15包培养基中的1-3组。记录培养后各稀释液中生长的试管数，然后检查样品中的最大细菌数，以获得样品和根中的细菌数。计算样品的稀释系数。活菌的含量。该方法通常用于食品中微生物的检测，如饮用水和牛奶中微生物限度的检测。
八、平板菌落计数法检测益生菌
       这是最常用的活细菌计数方法之一。采用梯度稀释法对供试菌液进行稀释。在固化前，将一定体积的稀释菌液与合适的固体介质均匀混合，或将菌液涂在固化后的固体介质板上。孵育后，用菌液稀释度乘以平板上菌落数，即可计算出原菌液中的菌数。在直径为9厘米的平板上通常最好有50-500个菌落。但是，这种方法繁琐，需要熟练的操作人员。平板菌落计数法不仅可以获得含菌液中的细菌，而且可以在分离培养细菌的同时获得单克隆抗体。
九、益生菌检测试剂纸方法
       在平板计数法的基础上，开发了以小厚滤纸和琼脂平板为形式的快速计数小商品。将合适的培养基吸入滤纸和琼脂片中，加入2,3,5-三苯基四唑氯化物（ttc，无色）作为活性指示剂，检测菌液后放置密封包装。文化袋。短期培养后，滤纸上出现一定浓度的玫瑰色微菌落，与标准纸样上的图谱相比，可估算出样品中的细菌含量。试剂纸法快速准确，避免了计数法的手工操作误差。
十、膜过滤法检测益生菌
       采用特殊的滤膜过滤一定体积的细菌样品。用亚丁橙染色法在紫外显微镜下观察细胞荧光。活细胞发出橙色荧光，死细胞发出绿色荧光。
十一、益生菌法测定氮含量
       干重方面，多数细菌含氮量为12.5%，酵母含氮量为7.5%，霉菌含氮量为6.0%。粗蛋白含量可根据氮含量6.25来确定。测定氮含量的方法有很多，如硫酸消化法、高氯酸消化法、碘酸消化法、磷酸消化法和杜马斯氮气法。dumas通过将样品与cuo混合并在co2气流中加热来产生n 2。它被收集在一个呼吸计和测量的koh吸收二氧化碳。
十二、益生菌法测定碳含量
       将少量生物材料（干重0.2-2.0mg）混合于1ml水或无机缓冲液中，用2ml 2%k2cr2o7溶液在100℃下加热30min。C，然后冷却。可通过将水稀释至5 ml并在580 nm处读取吸光度来估计生长。试剂作为空白对照，标准样品作为标准曲线。
十三、益生菌检测法测定还原糖
       还原糖通常是单糖或低聚糖，微生物可以直接使用。还原糖的测定可以间接反映微生物的生长情况，常用于大规模的微生物工业发酵。定期监测生长情况。该方法包括以下步骤：离心发酵液，提取上清液，加入飞林试剂，在沸水浴中煮沸3分钟，用少量盐酸酸化，最后加入淀粉溶液。na2s2o3，继续向终点加入na2s2o3，看表读取还原糖的含量。
       此外，许多生物制品公司采用传统的微生物检测方法原理，结合不同的检测方法，设计不同形式的微生物检测仪器和设备来检测益生菌。然而，随着技术的不断更新，商业化的微生物快速检测方法以其快速、准确、简便、自动化等特点迅速被益生菌检测所接受和推广。希望通过本文，我们能对益生菌的检测方法有一个基本的了解。